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前言
由于B群鏈球菌（Group B Streptococcus,
Streptococcus agalactiae, GBS，乙型鏈球 菌）可引起新生兒的肺炎(pneumonia)、腦膜
炎(meningitis)和敗血癥(sepsis)以及產(chǎn)婦敗血
癥及肺炎（圖1）[1, 2]，美國(guó)疾病控制與預(yù)防 中心(Centers for Disease Control and Prevention, CDC)建議懷孕35~37周之婦女需進(jìn)行陰道
及/或肛門拭子的 GBS 檢測(cè)，以期在分娩前
施與抗生素。此措施成功地降低新生兒GBS 感染率達(dá)75%以上，也使致死率由1970年的 50%大幅下降至1990年的5% [3]。在臺(tái)灣， 衛(wèi)生福利部國(guó)民健康署也為了提升產(chǎn)前GBS 檢查的普及率，于2014年 4 月起將 GBS 檢
測(cè)費(fèi)納入健保給付[4]根據(jù)美國(guó)CDC建議以及衛(wèi)福部國(guó)健署委 托臺(tái)灣醫(yī)事檢驗(yàn)學(xué)會(huì)擬定的偵測(cè)B 群鏈球菌 標(biāo)準(zhǔn)作業(yè)流程[3, 5]（圖2），建議以無菌棉拭 自陰道及/或直腸采檢后插入嗜氧檢體運(yùn)送管 (aerobic transport medium)，送到檢驗(yàn)室后，先劃種血瓊脂平板(BAP)，再將棉拭插入Lim broth（純?cè)鼍茫┗?span lang="EN-US">carrot broth（增菌與鑒 別用），在35℃一般恒溫箱培養(yǎng)18~24小時(shí) 后，若 BAP 上有疑似 GBS 的 -溶血型菌落
則需進(jìn)行CAMP (Christie, Atkins, and MunchPetersen)、hippurate（馬尿酸）水解或鏈球 菌分群試驗(yàn)加以確認(rèn)，如無發(fā)現(xiàn)疑似菌落， 則再將 Lim broth 增菌液再次移種一血瓊脂 平板，所有培養(yǎng)基均繼續(xù)培養(yǎng)18~24小時(shí)， 再發(fā)出最終報(bào)告。若接種carrot broth，則檢 視其是否顯色，若呈胡蘿卜色即可報(bào)告為GBS 陽性，若呈陰性，則再接種 GBS DetectTM （Hardy公司，美國(guó)），若有 -溶血型菌落， 則需如同Lim broth所移種BAP上的疑似菌 落進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)，如無發(fā)現(xiàn)疑似菌落，則所 有培養(yǎng)基均繼續(xù)培養(yǎng)18~24小時(shí)，再發(fā)出最
終報(bào)告。
雖然美國(guó)CDC及衛(wèi)福部國(guó)健署的建議流 程可將 GBS 的檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)化，但所用的 Lim broth增菌培養(yǎng)基方法需經(jīng)過多次移種培養(yǎng)確
認(rèn)，將會(huì)延遲報(bào)告3~4天[6]，而carrot broth 的接種需加一條促進(jìn)產(chǎn)色紙條[7]，以及所建 議移種的 GBS DetectTM 偽陽性高達(dá)58% (62/107) [8]，造成檢驗(yàn)人員的不便以及鑒定
人力與物力的浪費(fèi)。由于使用嗜氧檢體運(yùn)送 管運(yùn)送檢體不能立即增菌，并可能讓產(chǎn)道或 腸道棲息菌增生進(jìn)而干擾GBS的檢出。有鑒
于上述美國(guó)CDC及衛(wèi)福部國(guó)健署建議方法的 諸多缺點(diǎn)，啟新生物科技有限公司（新北市， 臺(tái)灣）遂設(shè)計(jì)孕婦產(chǎn)前檢查B 群鏈球菌的簡(jiǎn) 易高效快檢套組，其系由運(yùn)送裝置 CMPTM GBS
TransCultSwab（GBS 的運(yùn)送增菌培養(yǎng) 管）[9]結(jié)合 / GBS detection agar（偵測(cè)瓊 脂）[10] / GBS
carrot agar（GBS 胡蘿卜瓊脂）[11]分隔平板(Bi-plate)而組成，此套組以 簡(jiǎn)易操作、高檢出率（分離率）及可縮短報(bào) 告時(shí)間與減少檢驗(yàn)人員操作人力做為要求。 本研究將評(píng)估 GBS TransCultSwab 結(jié)合 / GBS detection agar /
GBS carrot agar分隔平 板的移種以確認(rèn)其在臨床實(shí)際應(yīng)用的有效性。
材料與方法 :
GBS檢驗(yàn)套組的組成 GBS 簡(jiǎn)易高效快檢套組的組成包括 CMPTM GBS TransCultSwab[9]與 / GBS detection
agar[10] / GBS carrot agar[11]分隔平板，每一個(gè)孕婦使用一支GBS
TransCultSwab 及一個(gè)分隔平板，分別介紹如下： GBS TransCultSwab（圖3A）：GBS TransCultSwab（專利證書I627277號(hào)）是一 種結(jié)合采檢、運(yùn)送、增菌與GBS假設(shè)性鑒定 四種功能的裝置，包裝中含有一支塑料管，
內(nèi)含可讓 GBS 增菌與實(shí)時(shí)抑制其它產(chǎn)道/直 腸棲息菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)基配方，以及使GBS的 -溶血株生長(zhǎng)后顯色的成份，以半固體的方式 配制以利運(yùn)送；裝置中另附一支無菌棉拭作
為采集產(chǎn)道及/或直腸分泌物檢體之用。醫(yī)師 采檢時(shí)將棉拭取出插入產(chǎn)道及（或）直腸約 2~3公分處旋轉(zhuǎn)兩圈采取足量分泌物后插至 含增菌培養(yǎng)基的塑料管中，在室溫或35℃恒
溫箱暫時(shí)保存，然后在最短的時(shí)間內(nèi)送至微 生物檢驗(yàn)室，檢驗(yàn)室收到此運(yùn)送裝置，登記 相關(guān)數(shù)據(jù)后，置于35℃的一般或 CO2 恒溫 箱，培養(yǎng)5~24小時(shí)后可在任何時(shí)間內(nèi)取出棉 拭移種至套組的分隔平板。 / GBS detection agar / GBS carrot agar 分隔平板：分隔平板中的 GBS carrot agar（專利證書I627277號(hào)）系針對(duì)GBS 溶血型菌株的偵測(cè)而設(shè)計(jì)的固體培養(yǎng)基，GBS carrot agar 含有特殊顯色基元可讓 -溶血型 GBS 的生長(zhǎng)菌落呈胡蘿卜色（圖3B 的右半 邊，呈米白色）， / GBS detection agar（專
利證書I561634號(hào)）系針對(duì)GBS -溶血型菌 株的偵測(cè)而設(shè)計(jì)。含有綿羊血與特殊的溶血
加強(qiáng)液，可讓 -溶血型菌落轉(zhuǎn)變成 -溶血型 （圖3C的左半邊，呈紅色），而其接種方法 （圖3 之操作流程）為取出 GBS Trans CultSwab 的棉拭劃種分隔平板的兩邊各約 1/3，然后利用接種環(huán)操作三區(qū)劃線技術(shù)，最
后在分隔平板的第一區(qū)培養(yǎng)基各插種5~7次， 接著放在35℃的一般或CO2恒溫箱培養(yǎng)20~48 小時(shí)。由于其它少數(shù)菌在 / GBS detection agar 的生長(zhǎng)菌落亦同樣地呈 -溶血，因此，
培養(yǎng)后任何懷疑的生長(zhǎng)菌落需再進(jìn)行適當(dāng)?shù)蔫b定試驗(yàn)（如CAMP試驗(yàn)、馬尿酸試驗(yàn)或血 清分群試驗(yàn)）加以確認(rèn)。
以臨床檢體實(shí)際評(píng)估GBS簡(jiǎn)易高效快檢套組 從 2016年 4 月 1 日至2017年 3 月 31日 止，新北市某醫(yī)事檢驗(yàn)所以CMPTM GBSTrans CultSwab 采檢744個(gè)產(chǎn)前 GBS 檢查檢體， 采集依產(chǎn)科門診的作業(yè)習(xí)慣暫時(shí)保存在室溫 或 35℃的一般或5 % CO 2 恒溫箱，再以常溫 方式運(yùn)送至微生物檢驗(yàn)室，放入35℃的一般
或 5% CO2 恒溫箱培養(yǎng)5~24小時(shí)。若中午前 收到檢體，則培養(yǎng)后在下班前一小時(shí)移種至
含 / GBS detection agar / GBS carrot agar 的分隔平板；若在中午后收到檢體，則培養(yǎng)
至次日早上移種。移種的方式如上述的分隔 平板使用說明。接著，將GBS TransCultSwab 與分隔平板培養(yǎng)置入35℃的一般或CO2 恒溫 箱培養(yǎng)20~48 小時(shí)，然后進(jìn)行判讀，若在 GBS carrot agar的生長(zhǎng)菌落呈橘～紅色，且 在 / GBS detection agar呈現(xiàn) -溶血現(xiàn)象即 可鑒定為GBS（圖3B及表1），又若在GBS carrot agar的生長(zhǎng)菌落不呈色，但在 / GBS detection
agar 呈現(xiàn) -溶血現(xiàn)象（圖3C 及表 1），則必須操作必要的鑒定試驗(yàn)（如CAMP 試驗(yàn)、馬尿酸試驗(yàn)或血清分群試驗(yàn)）加以確
認(rèn)。
GBS 簡(jiǎn)易、高效及快檢技術(shù)所用套組與傳統(tǒng) 檢驗(yàn)方法的成本與效能比較 以操作100個(gè)產(chǎn)前GBS檢查檢體為例， 假設(shè) GBS 陽性率為20%，將所評(píng)估的 GBS 簡(jiǎn)易高效快檢套組與當(dāng)前傳統(tǒng)檢驗(yàn)方法進(jìn)行 成本、操作方式、效能等比較。
結(jié)果 以臨床檢體實(shí)際評(píng)估GBS簡(jiǎn)易高效快檢套組 利用 GBS 簡(jiǎn)易高效快檢套組（結(jié)合 CMPTM GBS TransCultSwab與 / GBS detection
agar / GBS carrot agar 分隔平板）在12個(gè)月 間共評(píng)估744 個(gè)臨床產(chǎn)前檢查檢體，結(jié)果發(fā) 現(xiàn)孕婦的 GBS 檢出率(陽性率)為 24.32%
(181/744)，月的檢出率約介于18.60%~33.33%。 （表2）
GBS 簡(jiǎn)易、高效及快檢套組與公告的傳統(tǒng)檢 驗(yàn)方法、成本與效能比較 以操作100個(gè)產(chǎn)前 GBS 檢查檢體為例，假設(shè)GBS陽性率為20%，將GBS簡(jiǎn)易、高效 快檢套組與公告的傳統(tǒng)的 GBS 檢測(cè)方法進(jìn)行 成本與效能比較，傳統(tǒng)檢測(cè)方法為利用嗜氧 運(yùn)送管采檢及運(yùn)送，送至檢驗(yàn)室后接種血平 板或顯色平板(CHROMagar StrepB)以及Lim broth或carrot broth，培養(yǎng)后進(jìn)行判讀，結(jié)果 顯示 GBS 簡(jiǎn)易高效快檢套組在操作時(shí)間、檢
出率、報(bào)告時(shí)效、成本以及簡(jiǎn)易性等項(xiàng)目皆 優(yōu)于公告的傳統(tǒng)GBS檢測(cè)方法。（表3）。
討論
GBS 的孕婦帶原者約為15~30%[12-17]，
醫(yī)師對(duì)帶原者常用的預(yù)防用藥為 penicillin [3]，其施用時(shí)機(jī)為分娩前4 小時(shí)，但若孕婦 對(duì)其過敏，則檢驗(yàn)室需提供其它適當(dāng)藥物的 藥敏型式。又如果發(fā)生早產(chǎn)，羊水提早破裂， 胎兒很可能因此受到感染。因此在孕婦產(chǎn)前 GBS檢查的正確性與快速性對(duì)預(yù)防性抗生素 的應(yīng)用將具有重要性。 傳統(tǒng)孕婦產(chǎn)前GBS檢驗(yàn)方法為采檢后送
至檢驗(yàn)室立即接種BAP或其它選擇區(qū)分性顯 色瓊脂（如CHROMagar
StrepB），然而兩 者 GBS 檢出率不高，僅為7.5%[18]以及 9.7~11.8%[19]，且BAP 與顯色平板生長(zhǎng)菌落 對(duì) GBS 均不具有特異性，前者為滋養(yǎng)培養(yǎng) 基，革蘭氏陽性及陰性菌都可以生長(zhǎng)，而后 者有許多其它菌如Streptococcus pneumoniae Streptococcus pyogenes (GAS)、Group G Streptococcus (GGS)、Staphylococcus
aureus、 S. epidermidis與Stenotrophomonas
maltophilia 的生長(zhǎng)菌落也呈現(xiàn)與GBS同樣的紫色菌落形態(tài)，而無法彼此區(qū)分，CHROMagar StrepB 顯色瓊脂的特異性僅達(dá)70% (24/40)[11]，此
發(fā)現(xiàn)與CHROMagar StrepB顯色瓊脂的使用 說明一致[20]。因此，在實(shí)際應(yīng)用時(shí)，任何紫
色菌落在CHROMagar StrepB的出現(xiàn)還需進(jìn) 行 CAMP 或 hippurate 水解等鑒定試驗(yàn)以確 認(rèn)分離菌為GBS，此額外試驗(yàn)將延遲檢驗(yàn)報(bào)
告 1 天，也更浪費(fèi)人力及物力。另外，林等 [21]以 PCR DNA方法檢測(cè)晚孕期陰道B 群鏈 球菌的定植分別發(fā)現(xiàn)其檢出率為14.1% (288/1,472)，而楊等[22]及季等[23]應(yīng)用實(shí)時(shí)螢 光定量PCR技術(shù)指出GBS的陽性率為13.5% (85/600)與 4.17% (377/9,073)。分子診斷技
術(shù)雖然快速獲得檢測(cè)結(jié)果，但檢出率不高， 且萃取檢體中的菌體DNA，不僅費(fèi)時(shí)、成本 高、須有昂貴的設(shè)備與良好的實(shí)驗(yàn)室環(huán)境以
及勝任的操作人員，且無法實(shí)時(shí)獲得進(jìn)行藥 敏試驗(yàn)所需的GBS生長(zhǎng)菌落，美國(guó)的疾病管 制署(CDC)[3]并不建議使用分子檢測(cè)方法直 接從孕婦產(chǎn)前檢體偵測(cè)GBS。 本研究指出GBS簡(jiǎn)易、高效快檢套組證 實(shí) CMPTM GBS TransCultSwab具有采檢/運(yùn)送/增菌及假設(shè)性鑒定 GBS 的效能，檢驗(yàn)人
員的使用將不需再移種增菌培養(yǎng)基(Lim broth 或carrot
broth)，也不需如同美國(guó)Hardy生產(chǎn) 的carrot
broth需額外插入加強(qiáng)顯色紙條，因 此 GBS TransCultSwab的操作堪稱簡(jiǎn)易、方 便與親民(user friendly)。另外，GBS Trans CultSwab移種的分隔平板中GBS carrot agar 偵測(cè) -溶血型GBS的特異性高達(dá)100%[11]， 因此，任何橘~紅色的生長(zhǎng)菌落可借著顯色特征快速檢出GBS。GBS除了 -溶血型外， 尚有3~5%屬于非( )溶血型[3]，此可藉者分 隔平板的 / GBS detection agar快速偵測(cè)， 因此，檢測(cè)套組對(duì)GBS的偵測(cè)是全面性的， 雖然美國(guó)Hardy Diagnostics已研發(fā)可用于偵 測(cè) 溶血型GBS的區(qū)分性培養(yǎng)基-GBS DetectTM （平板培養(yǎng)基），發(fā)現(xiàn) 溶血型 GBS 從孕婦 檢體的檢出率為3.9% (24/619)，但因其偽陽 性高達(dá)58% (62/107)[8]，將導(dǎo)致檢驗(yàn)人力的浪費(fèi)及偽陽性的產(chǎn)生，綜合以上及本研究之
臨床744件檢體測(cè)試結(jié)果，使用 GBS Trans CultSwab搭配 / GBS detection agar / GBS carrot agar 分隔平板的移種，對(duì)GBS偵測(cè)率 （檢出率）高達(dá)24.32%。（表2） 過去研究曾指出Enterococcus spp.（腸 球菌）的菌量高于 -溶血型GBS十倍時(shí)會(huì)干 擾（掩蓋或抑制） -GBS在 GBS carrot agar [11]和GBS TransCultSwab的顯色能力[24-26]。 推測(cè)Enterococcus spp.干擾 -GBS的原因可 能為其等同屬一個(gè)菌科，生長(zhǎng)條件相同，且
在增菌培養(yǎng)基的生長(zhǎng)速度相近之故，但在相 等菌量存在時(shí)則不影響顯色。目前尚無法從 配方的改變加以改善，但運(yùn)送管增菌培養(yǎng)5 小時(shí)后，搭配 / GBS detection agar / GBS carrot agar的三區(qū)劃線法移種，將可隔離GBS 與 Enterococcus spp.，而避免后者的干擾 [25]， -GBS雖然在carrot
agar不顯色，但可 在 / GBS detection agar產(chǎn)生 -溶血型菌落， 只要進(jìn)行必要的 CAMP、馬尿酸(hippurate) 水解或鏈球菌血清分群試驗(yàn)將可立即加以區(qū) 分[10]。
孕婦產(chǎn)前檢查GBS分離率受到各種因素 影響[12]，包括(i) 醫(yī)師或護(hù)理師的采檢技術(shù)： 此因素影響GBS分離率最大，如果僅采集產(chǎn)
道，應(yīng)該將棉拭深入產(chǎn)道內(nèi)2 公分，慢慢旋 轉(zhuǎn) 2 圈已得到最大量的分泌物為原則；如果
用同一支棉拭采檢直腸部位檢體，也是操作 同樣的采檢技術(shù)。有些醫(yī)師欲分別得到產(chǎn)道 與直腸的檢體，則共取2 支無菌棉拭采檢。 (ii) 特殊增菌與分離培養(yǎng)基的使用：GBS 的 棉拭檢體不能直接接種平板培養(yǎng)基，必須先
經(jīng)過增菌，才能移種或操作real-time PCR。 增菌肉湯培養(yǎng)基包括carrot
broth, Lim broth, Trans-Vag broth 以及本研究所建議的 GBS
TransCultSwab，分離培養(yǎng)基則包括CHROMagar StrepB、BAP、CNA、PEA、GBS DetectTM以 及本研究所建議含 / GBS detection agar/
GBSCarrot agar的bi-plate，其中GBS
DetectTM、 bi-plate 與 CHROMagar
StrepB 均能測(cè)出 GBS，但因兩者偽陽性高，因此均需要挑取 GBS懷疑菌落進(jìn)一步操作確認(rèn)試驗(yàn)（如CAMP 試驗(yàn)）。(iii) GBS檢測(cè)的操作技術(shù)以及檢驗(yàn) 人員的訓(xùn)練與經(jīng)驗(yàn)：如果直接將棉拭檢體接 種 BAP 等分離培養(yǎng)基或操作 PCR 等分生技 術(shù)，GBS分離率僅約7~10%左右；如果僅用 GBS TransCultSwab 的培養(yǎng)結(jié)果，在醫(yī)師正
確采檢技術(shù)及檢驗(yàn)人員對(duì)判讀有6 個(gè)月以上 經(jīng)驗(yàn)的條件下，GBS分離率為18.63% (30/161) [9]以及18.28%[21]，如果沒有足夠的判讀經(jīng)
驗(yàn)，分離率約為11.03%[21]，因此，GBSTrans CultSwab 應(yīng)該配合 / GBS detection agar/ GBS Carrot agar的 bi-plate的移種才能夠達(dá) 到本研究所顯示的高GBS分離率(24.32%)。 (iv) / GBS detection agar/ GBS
Carrot agar 的bi-plate接種技術(shù)：由于是分隔培養(yǎng)基，因 此選用三區(qū)劃線技術(shù)，移種的第一區(qū)約占表
面積的1/3，然后將接種環(huán)滅菌冷卻后再涂畫 第二區(qū)，同樣地，再次將滅菌環(huán)滅菌后再涂 畫第三區(qū)，最后在第一區(qū)插種5 次，以便獲 得無氧環(huán)境，更利于 -GBS 在 bi-plate 分別 產(chǎn)生橘-紅色[11]及產(chǎn)生 -溶血環(huán)。(v) 棉拭檢 體需有足夠的增菌時(shí)間：無論在carrot broth, Lim broth, Trans-Vag broth 以及GBS
Trans CultSwab均需要培養(yǎng)在35~37℃的CO2 培養(yǎng)
箱，肉湯培養(yǎng)基須培養(yǎng)20~24小時(shí)，而GBS TransCultSwab則培養(yǎng)5~24小時(shí)，才能移種 至CHROMagar StrepB、BAP、CNA、PEA、 GBS DetectTM 之一的分離培養(yǎng)基。以及(vi) 延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間及再次移種：GBS 檢測(cè)的棉拭 檢體經(jīng)過增菌、移種及培養(yǎng)后如果沒有顯示 生長(zhǎng)，增菌培養(yǎng)基最好延長(zhǎng)培養(yǎng)一天，然后 再進(jìn)行平板培養(yǎng)基的移種及培養(yǎng)后的觀察。
總之，除了提高GBS的檢出率、有能力 偵測(cè) -溶血型 GBS 以及避免 Enterococcus spp.的干擾外，本研究亦發(fā)現(xiàn)此套組的分隔平板在培養(yǎng)隔日即可鑒定出GBS，其陽性生 長(zhǎng)菌落可隨即用于操作藥敏試驗(yàn)，如此，將 可縮短至少一天的報(bào)告時(shí)間，并且GBS
Trans CultSwab 運(yùn)送管與 GBS carrot agar 上的顯 色及在 / GBS detection agar呈現(xiàn)的 -溶血 特征將可做為三重復(fù)確認(rèn)(triple-check) GBS 的存在，由于檢驗(yàn)人員僅需移種一次，且花 費(fèi)時(shí)間僅約15秒，對(duì)檢驗(yàn)人員堪稱方便，操
作人員僅需稍微訓(xùn)練即能進(jìn)行檢驗(yàn)工作，因 此，對(duì)臨床檢驗(yàn)室而言，GBS TransCultSwab 結(jié)合 / GBS detection agar / GBS carrot agar 的移種將具備簡(jiǎn)易、快速及高通量(highthroughput)檢測(cè)的優(yōu)點(diǎn)，值得臨床檢驗(yàn)室加 以應(yīng)用，以便將陽性檢驗(yàn)結(jié)果實(shí)時(shí)提供醫(yī)師 做為預(yù)防新生兒與孕婦感染的參考。
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